مراحل مهندسی ژنتیک

1-- عصاره ی سلولی دارای پلازمید جدا از سلولهای دیگر باکتری ، قرار می گیرد

2-سلولهای پلازمید به عنوان وکتور ازعصاره ی سلولی خارج می شوند

3- سا ختار یک پلازمید . شامل : 1-محل قرار گرفتن DNA خارجی.2-خاستگاه اغاز همانند سازی.3-ژن مقاوم نسبت به انتی بیوتیکی خاص مثلا تتراسایکلین

4- DNA خارجی می تواند درهر نقطه از این منطقه قرار گیرد ولی قبل از ان باید شکاف پیدا کند

5- انزیم محدود کننده ENDONUCLEASE ، DNA پلازمید را در توالی معین باز می کند

6- DNA پلازمید در این توالی معین از هم باز می شود

7- دو انتهای برش خورده DNA پلازمید بسیار نا پایدار هستند به همین دلیل به انها انتهای چسبنده می گویند ، و ممکن است دوباره به هم متصل شوند

8- DNA های خارجی مورد نظر برای کلون شدن که قبلا توسط انزیم های محدود کننده ، در توالی معین که مکمل توالی محل برش DNA پلازمید می باشد ، برش خورده اند به DNA های برش خورده پلازمید اضافه می شوند

9- قطعه ی DNA خارجی در پلازمید قرار می گیرد(به توالی بازها توجه کنیذ)

10- در حال حاضر فقط پیوند هیدروژنی بین باز ها صورت گرفته است و برای قرار دادن کامل DNA خارجی در DNA پلازمید باید بین این دو پیوند فسفودی اسر ایجاد کنیم که این فرایند با افزودن انزیمی به نام لیگاز صورت می گیرد

11- ساختار پلازمید دارای صفات وراثتی جدید:1-DNA خارجی قرار گرفته در DNA پلازمید برای کلون شدن.2-خاستگاه اغاز همانند سازی باکتری.3-ژن مقاوم نسبت به انتی بیوتیکی خاص مثلا تتراسایکلین

12- پیکانها DNA خارجی را نشان می دهند

13- پلازمید نوترکیب به درون سلول باکتری E.coli هدایت می شود ولی فقط بعضی از باکتریها می توانند انرا در یافت نمایند

14- سلولهای مشخص باکتری با سلولهایی که پلازمید نوترکیب درون انها قرار دارد مخلوط می باشند

15- با اضافه کردن انتی بیوتیک مشخص ان دسته از سلولهای باکتری که دارای پلازمید نوترکیب می باشند و ژن مقاومت نسبت به ان را دارند باقی مانده و دیگر سلولهای باکتری از بین می روند

16- پلازمید نوترکیب به خودی خود می تواند تکثیر یابد و یا به وسیله ی باکتری برای تکثیر باکتری ، تکثیر شود. توجه داشته باشید که همانند سازی و تکثیر از خاستگاه اغاز همانند سازی شروع می شود

17- باکتری در حال دو نیم شدن است که قبل از ان پلازمید نوترکیب خود را تکثیر نموده است

18- باکتری به دو باکتری جدید که هر یک دارای 1 پلازمید نوترکیب هستند تبدیل شده است

19- عمل کلون شدن پلازمید نوترکیب در تمام سلولها صورت می گیرد که در نتیجه ی ان تعداد زیادی از DNA خارجی که درون پلازمید نوترکیب بود کلون شده و به وجود می اید

20- در پایان به کمک عمل الکتروفورز بر روی پلازمید نوترکیب ، DNA خارجی را از پلازمید جدا می سازند